禽腦脊髓炎病毒抗體(AEV-Ab)elisa試劑盒實驗前的準備：

1） 確定試劑盒在有效期內

2） 仔細閱讀說明書，按說明書確定所有試劑齊全（數量、體積）

3） 提前準備好所有實驗額外所需的設備（如離心機、37℃恒溫箱、高精度加樣器及槍頭、酶標儀等）

4） 標本制備要規(guī)范，每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備（貯存），盡量分裝做備份。短期內無法實驗者注意低溫保存。根據檢測標本數量確定所需試劑的量

5） 按說明書將所有試劑平衡至室溫，配制所需試劑。嚴格按照說明書進行實驗步驟。

檢測原理：試劑盒采用一步間接法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被腦脊髓炎病毒（AEV）抗原的包被微孔中，依次加入標本、HRP標記的檢測抗抗體，經過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值），與CUT OFF值相比較，從而判定標本中禽腦脊髓炎病毒抗體（AEV-Ab）的存在與否。

樣品收集、處理及保存：

1.  細胞培養(yǎng)上清：適用于檢測體外培養(yǎng)的細胞分泌性成份。用無菌管收集細胞上清液，以1000×g離心15分鐘，收集上清。

2.  細胞：用PBS反復洗滌細胞3次，調整細胞濃度達到104-106/ml 左右，通過反復凍融，使細胞破壞并放出細胞內成份，或者細胞超聲粉碎，離心取上清液檢測。

3.  血清：在室溫下，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘，取上清待測。

4.  血漿：應根據標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置10-20 分鐘后，以1000×g離心15分鐘，收集上清。

5.  體液：包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原和內毒素的離心管收集，以1000×g離心15分鐘，收集上清。

6.  組織標本：切取組織標本，稱取重量0.5mg，加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器，或超聲破碎儀將標本勻漿，以2000-3000 rmp離心20 分鐘，收集上清進行檢測。

7.  樣品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

8. 保存：如果樣品不能立即檢測，應將其分裝，-80 ℃保存，避免反復冷凍。保存過程中如出現沉淀，應再次離心。血液標本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

禽腦脊髓炎病毒抗體(AEV-Ab)elisa試劑盒結果判斷

 1.  試驗有效性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00；

                陰性對照孔OD值平均值≤0.15。

2.  臨界值（Cut off）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

3.  陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性

4.  陽性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off），樣品為陽性

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